使用奧林巴斯 CX33 顯微鏡觀察化妝品顆粒時(shí)，需結(jié)合其正置顯微鏡的特性及化妝品樣品的多樣性，從樣品預(yù)處理到顯微成像分析進(jìn)行系統(tǒng)性操作。以下是詳細(xì)流程與注意要點(diǎn)：

一、奧林巴斯 CX33 顯微鏡樣品預(yù)處理：根據(jù)化妝品類型選擇合適方法

1. 液態(tài) / 乳霜狀化妝品（如精華液、乳液）

稀釋處理：若樣品黏稠度高，用無菌 PBS 緩沖液或生理鹽水按 1:10 - 1:100 比例稀釋，避免顆粒聚集。

過濾富集：通過 0.45 μm 濾膜過濾稀釋液，將顆粒截留于濾膜表面，提高觀察效率（適用于微米級(jí)顆粒）。

制片技巧：取濾膜或稀釋液滴于載玻片，加蓋蓋玻片時(shí)從一側(cè)緩慢放下，避免氣泡產(chǎn)生。

2. 固態(tài) / 粉體類化妝品（如散粉、眼影）

分散處理：將少量粉體置于載玻片，滴加無水乙醇或液體石蠟（防止靜電團(tuán)聚），用牙簽輕輕攪勻。

超聲輔助：若顆粒結(jié)塊，可將樣品懸液放入超聲儀中處理 1 - 2 分鐘，使其均勻分散。

過篩分級(jí)：通過不同孔徑篩網(wǎng)（如 10 μm、50 μm）篩分顆粒，分離出目標(biāo)尺寸范圍的樣品觀察。

3. 特殊樣品（含熒光顆粒或納米材料）

熒光標(biāo)記：若顆粒本身無熒光，可使用熒光染料（如羅丹明 B）染色，或利用納米顆粒的表面修飾熒光基團(tuán)直接觀察。

負(fù)染色法：用磷鎢酸（2% 濃度）對(duì)納米顆粒染色，增強(qiáng)對(duì)比度（適用于透射電鏡觀察前的預(yù)篩選）。

二、奧林巴斯 CX33 顯微鏡操作設(shè)置

1. 光源與光路優(yōu)化

白光觀察模式：

開啟 30W 鹵素?zé)?，通過柯勒照明系統(tǒng)調(diào)節(jié)聚光鏡和孔徑光闌，使光線均勻覆蓋樣品（亮度以顆粒邊緣清晰為宜）。

對(duì)透明顆?？汕袚Q至相襯（PH）模式，利用光程差增強(qiáng)對(duì)比度；對(duì)不透明顆粒用明場(chǎng)（BF）模式。

熒光觀察模式（若含熒光顆粒）：

根據(jù)熒光顆粒的激發(fā)波長(zhǎng)選擇濾光片組，例如：

綠色熒光顆粒：選用藍(lán)光激發(fā)通道（BP470 - 490nm），發(fā)射光 BP510 - 550nm；

紅色熒光顆粒：選用綠光激發(fā)通道（BP530 - 550nm），發(fā)射光 BP570 - 620nm。

調(diào)節(jié)光闌孔徑至 50% - 70%，避免強(qiáng)光導(dǎo)致熒光淬滅。

2. 物鏡選擇與對(duì)焦

低倍物鏡（4X/10X）：初步掃描樣品，觀察顆粒分布密度、大致尺寸及團(tuán)聚情況。

高倍物鏡（40X/100X 油鏡）：定位目標(biāo)顆粒后切換，使用油鏡時(shí)滴加香柏油，通過微調(diào)焦旋鈕獲取清晰圖像（注意避免鏡頭壓碎玻片）。

三、奧林巴斯 CX33 顯微鏡觀察內(nèi)容與分析要點(diǎn)

1. 顆粒形態(tài)與尺寸測(cè)量

形態(tài)特征：記錄顆粒形狀（球形、片狀、針狀等）、表面光滑度、有無破損或團(tuán)聚現(xiàn)象。例如：

納米級(jí)二氧化鈦顆粒常呈球形，分散良好時(shí)邊緣清晰；若團(tuán)聚則呈不規(guī)則團(tuán)塊。

尺寸量化：利用顯微鏡配套軟件（如 CellSens）的標(biāo)尺功能，測(cè)量顆粒長(zhǎng)徑、短徑，統(tǒng)計(jì)粒徑分布（建議測(cè)量≥100 個(gè)顆粒）。

2. 成分與結(jié)構(gòu)分析（結(jié)合輔助技術(shù)）

熒光顆粒定位：若顆粒標(biāo)記熒光，觀察熒光分布是否均勻（如包裹型脂質(zhì)體顆?？赡艹尸F(xiàn)邊緣熒光增強(qiáng)）。

折射率差異：通過偏光模式觀察顆粒雙折射現(xiàn)象（如云母粉體在偏光下呈現(xiàn)彩色干涉條紋），輔助判斷礦物成分。

3. 化妝品顆粒的功能性評(píng)估

分散穩(wěn)定性：觀察靜置不同時(shí)間后顆粒是否沉降、聚集，評(píng)估配方穩(wěn)定性（如乳液中的活性成分載體顆粒）。

表面修飾效果：對(duì)比未經(jīng)處理與表面包覆（如硅烷偶聯(lián)劑修飾）的顆粒，觀察分散性或熒光強(qiáng)度變化（適用于納米載藥顆粒）。

四、LV2000顯微鏡相機(jī)圖像記錄與數(shù)據(jù)處理

多通道成像：同時(shí)采集白光與熒光圖像，通過軟件疊加分析顆粒分布與熒光標(biāo)記的相關(guān)性。

統(tǒng)計(jì)分析：使用 ImageJ 或 Excel 對(duì)顆粒尺寸、形態(tài)進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，繪制粒徑分布直方圖（如 D10、D50、D90 參數(shù)）。

對(duì)比實(shí)驗(yàn)：設(shè)置對(duì)照組（如未處理樣品 vs. 處理后樣品），量化分析工藝（如研磨、超聲）對(duì)顆粒特性的影響。

五、奧林巴斯 CX33 顯微鏡注意事項(xiàng)

樣品污染控制：

所有器材（載玻片、鑷子）需經(jīng)乙醇消毒，避免外界雜質(zhì)干擾觀察。

液態(tài)樣品若含防腐劑（如苯氧乙醇），可能影響顆粒形態(tài)，建議預(yù)處理時(shí)用透析袋去除。

鏡頭維護(hù)：

油鏡使用后立即用鏡頭紙蘸取二甲苯擦拭，避免香柏油固化損傷鏡頭。

安全防護(hù)：

若樣品含刺激性成分（如高濃度酸 / 堿），需佩戴手套操作，觀察后及時(shí)清洗載物臺(tái)。

六、奧林巴斯 CX33 顯微鏡延伸應(yīng)用：結(jié)合其他技術(shù)深度分析

聯(lián)用掃描電鏡（SEM）：對(duì) CX33 觀察到的典型顆粒進(jìn)一步用 SEM 表征表面微觀結(jié)構(gòu)（如孔隙率、粗糙度）。

拉曼光譜分析：在顯微鏡下定位顆粒后，聯(lián)用拉曼光譜儀檢測(cè)化學(xué)成分（如區(qū)分有機(jī)顏料與無機(jī)粉體）。

通過上述方法，可利用奧林巴斯 CX33 的高分辨率與熒光成像能力，實(shí)現(xiàn)對(duì)化妝品顆粒的形態(tài)、尺寸及功能性的系統(tǒng)分析，為配方優(yōu)化、質(zhì)量控制提供可視化數(shù)據(jù)支撐。